體外培養(yǎng)細胞,根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性,可分為懸浮型和貼壁型兩大類。
(一)懸浮型細胞
簡稱懸浮細胞。在體外培養(yǎng)時,這些細胞屬于非貼壁依賴的細胞,這些細胞的細胞質(zhì)膜也會與培養(yǎng)液底發(fā)生黏連,但最多不超過5%的表面與培養(yǎng)液底發(fā)生類似于細胞連接樣的黏連,顯微視場下細胞往往呈球形。
懸浮型細胞主要是來源于血液、淋巴組織的細胞,骨髓瘤構(gòu)建的各種雜交瘤細胞,某些腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞。
細胞呈圓形,一般不貼于支持物上,呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。
體外培養(yǎng)的細胞類型中,少數(shù)細胞種類在培養(yǎng)時不貼附于支持物上,而以懸浮狀態(tài)生長,包括一些取自血、脾或骨髓的原代細胞,尤其是血液白細胞,以及一些腫瘤細胞。某些來源于此類細胞的細胞株或細胞系也呈懸浮狀態(tài)生長。
細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團,胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長,生存空間大,允許長時間生長,便于大量繁殖。
屬于懸浮型細胞常見的細胞株系有小鼠腹水瘤S180、小鼠骨髓瘤NS1和SP2/0,人造血系腫瘤細胞U937(見文章結(jié)尾圖片)、HL60、K562(見文章結(jié)尾圖片)等。技術(shù)詳情聯(lián)系靶點科技技術(shù)支持。
(二)貼壁型細胞
簡稱貼壁細胞。在體外培養(yǎng)時,貼壁型細胞就是那些貼壁依賴的細胞,在匯合成單層生長以前,它們的細胞質(zhì)膜超過30%的表面與培養(yǎng)液底發(fā)生類似與細胞連接樣的黏連,顯微視場下細胞一般為扁平狀的各種形態(tài)。需要注意的是,貼壁型細胞匯合生長形成單層以后,失去接觸抑制的那些細胞株或細胞系的細胞培養(yǎng)物中,常??梢娀蚨嗷蛏俚膽腋蛹毎霈F(xiàn)。
貼壁型細胞包括大多數(shù)哺乳動物的淋巴和血液以外的組織細胞,以及多數(shù)腫瘤細胞。需要貼附在帶適量正電荷的固體或半固體表面才能正常生長和分裂。
大多數(shù)培養(yǎng)細胞均為貼壁型,它們必須貼附在支持物表面生長,這類細胞在體內(nèi)時各自具有其特殊的形態(tài),但在體外培養(yǎng)時貼附于支持物后形態(tài)上表現(xiàn)單一化而失去體內(nèi)原有的某些特征,多呈上皮樣或成纖維細胞樣。
正常貼壁型細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性,細胞相互接觸后可抑制細胞的運動,因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后,雖發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,仍可增殖分裂,但當細胞數(shù)量達到一定密度后,由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,細胞分裂停止,稱為密度抑制。
腫瘤細胞的接觸抑制及密度抑制往往減弱或消失,因此細胞可向三維空間發(fā)展,導致細胞堆積,并可生長至較高的終末細胞密度。
貼壁細胞類型有以下幾種常見類型
1.成纖維細胞型
細胞呈梭形、扇形、星形或不規(guī)則三角形,中央有卵圓形核,胞質(zhì)常向外伸出3-5個長短不一的突起,生長時呈放射狀。細胞匯合過程中,細胞的生長呈放射狀、火焰狀或漩渦狀。
除了真正的成纖維細胞外,凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內(nèi)皮等常呈成纖維細胞形態(tài)。培養(yǎng)中細胞的形態(tài)與成纖維細胞類似時皆可稱之為成纖維細胞(圖10-2)。
2.上皮型細胞
細胞呈扁平不規(guī)則多邊形,中央有圓形核,細胞外觀透明,細胞彼此緊密相連成單層生長。生長時呈膜狀移動,處于膜邊緣的細胞總與膜相連,很少單獨行動。起源于內(nèi)、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。上皮細胞傳代培養(yǎng)后形態(tài)特征逐漸趨于典型。
3.游走細胞型
呈散在生長,一般不連成片,胞質(zhì)常突起,呈活躍游走或變形運動,速度快且方向不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定,有時難以和其他細胞相區(qū)別。起源于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細胞屬于此類型。
4.多型細胞型
有一些細胞,如神經(jīng)細胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài),統(tǒng)歸于此類。此類細胞在培養(yǎng)時,其形態(tài)結(jié)構(gòu)容易受培養(yǎng)條件(基質(zhì)、溫度、pH、營養(yǎng)、污染狀況和培養(yǎng)方式等)影響。
如角膜上皮細胞在膠原基質(zhì)上的形態(tài)與體內(nèi)天然形態(tài)相似,但在塑料基質(zhì)表面細胞呈單層生長,細胞呈扁平形。上皮型Hela細胞在偏酸或偏堿的培養(yǎng)環(huán)境下會停止生長,細胞形態(tài)呈梭形、不規(guī)則形,及時糾正pH后,細胞又恢復原來的正常形態(tài)。
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