藥物開發(fā)領(lǐng)域里,寡核苷酸已經(jīng)廣泛應(yīng)用于靶向基因治療的研究。自2018年1月起FDA已批準(zhǔn)多款產(chǎn)品上市,早期批準(zhǔn)的產(chǎn)品以皮下和靜脈內(nèi)給藥為主,皮下施用的Kynamro利用寡核苷酸在肝臟和腎臟中積累的趨勢(shì);靜脈內(nèi)給藥的Exondys 51利用杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良患者肌肉細(xì)胞攝取增加的趨勢(shì)。
基礎(chǔ)研究中,低豐度蛋白怎樣能進(jìn)行精確和有效檢測(cè)?抗體-寡核苷酸 (Ab-oligo) 偶聯(lián)物技術(shù),是一個(gè)不錯(cuò)的選擇,現(xiàn)已被用于從診斷到治療的眾多應(yīng)用中。Ab-oligo 偶聯(lián)物在強(qiáng)化多項(xiàng)生物技術(shù)方面發(fā)揮著重要作用,這些技術(shù)包括免疫學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究、生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)、臨床診斷(包括即時(shí)護(hù)理)及其他新型技術(shù)。因?yàn)楣押塑账峋哂卸鄠€(gè)官能團(tuán),所以抗體可以通過氨基酸殘基輕松地與寡核苷酸偶聯(lián),因此適用于大多數(shù)體外應(yīng)用。
抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物應(yīng)用
1.免疫聚合酶鏈反應(yīng) (immuno-PCR)
與 ELISA 類似,免疫 PCR 也是一項(xiàng)利用抗體檢測(cè)和定量混合樣本中特定抗原(分析物) 的強(qiáng)大技術(shù)。但是,在免疫 PCR 中,Ab-oligo 偶聯(lián)物會(huì)與固定分析物結(jié)合,然后通過 RT-PCR 使附著的 DNA 擴(kuò)增。
在免疫 PCR 中使用 Ab–oligo 偶聯(lián)物,可以提高蛋白檢測(cè)和定量的靈敏度;由于它融合了抗體的檢測(cè)特異性和 RT-PCR 的核酸檢測(cè)靈敏度,因此明顯優(yōu)于一般的 ELISA 法。20 多年來,將免疫檢測(cè)與 RT-PCR 進(jìn)行結(jié)合已成為一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。
由于免疫 PCR 具有強(qiáng)大的擴(kuò)增能力,而且特異性和靈敏度更高,高出 ELISA 100-10,000 倍,因此檢測(cè)的下限更低,擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過凝膠電泳進(jìn)行觀察,從而確定結(jié)合分析物是否存在。
2.多重檢測(cè)開發(fā)
多重蛋白檢測(cè)有助于定量使用通用捕獲技術(shù)同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣本中的多種目標(biāo)分析物,從而減少工作流程和樣本量問題。但是,這種檢測(cè)方法受到檢測(cè)特異性、靈敏度和通量等因素的限制。
開展多重免疫檢測(cè)的方法有很多,大致可分為兩類:在固體表面固定,每種分析物在獨(dú)立的空間內(nèi)進(jìn)行檢測(cè);固定于磁珠或顆粒上,每種分析物在不同的磁珠/顆粒上進(jìn)行檢測(cè)。如今,多重蛋白檢測(cè)技術(shù)利用 DNA 兩條互補(bǔ)鏈之間的特異性結(jié)合,將每種同源物對(duì)應(yīng)的一條鏈(分析物)固定在固體支持物上,例如微量滴定板。將 Ab-oligo 偶聯(lián)物合并,并與孔內(nèi)的特定固定捕獲寡核苷酸雜交,從而創(chuàng)建抗體陣列。
MajicLink oligo-antibody conjugation Kit寡核苷酸偶聯(lián)試劑盒的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì):
-反應(yīng)迅速、操作簡(jiǎn)單,30 分鐘即可激活抗體和寡核苷酸,1 小時(shí)即可完成寡核苷酸偶聯(lián),無需具備專業(yè)科學(xué)知識(shí),省時(shí)省力
-清潔程序穩(wěn)定、靈活(適用于抗體片段和其他蛋白),抗體或者蛋白均可
-抗體和寡核苷酸回收率高,可幫您節(jié)省寶貴的試劑
-單向化學(xué),消除了交聯(lián)的風(fēng)險(xiǎn)
-共價(jià)鍵形成的偶聯(lián)物高度穩(wěn)定
-適用于含 10-120 個(gè)堿基對(duì)的單鏈寡核苷酸,含多達(dá) 80 個(gè)堿基對(duì)的雙鏈寡核苷酸
-連接化學(xué)發(fā)生在 5' 端和 3' 端的末端,可以與其他修飾結(jié)合
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